特色技术
幽门螺杆菌培养、测定、药敏检测试剂盒(微生物检验法)
HP 测定药敏试剂盒标准操作规程
一、标本接收
1) 检查培养基盖子有无拧紧,有无漏液现象;
2) 检查胃粘膜有无浸泡在培养液中;
3) 检查胃粘膜是否含肉红色腺腔(见附图1)
4) 接收含胃粘膜标本的培养基后,应立即置35~37℃恒温培养,72小时后逐日观察培养液颜色
及浊度变化;
附图1:
二、分离培养基结果判读
5) 培养3-5 天,若HP 分离培养液变红且有明显细小紫红色颗粒,颗粒间液体清亮,提示有
HP 生长;当目测生长至高峰期时,可进行测定药敏试验;
6) 培养5 天后HP 分离培养液保持黄色澄清透明(无变化),表明无HP 生长,可判HP培养阴性。
三、行药敏时机
当分离培养基一旦变红有颗粒时,一般延长培养2天后达到高峰期,即可行药敏试验。附HP
生长示意图:
四、HP 测定药敏型操作步骤
1. 试剂及工具准备
1) HP阳性培养物准备;
2) 取出储存在0℃以下的HP药敏培养液、微孔板、CAT反应液、封孔膜,恢复至室温;
3) 微量移液器50-100微升量程、配套无菌吸嘴备用;
4) 超净工作台/安全柜内操作。
2. 测定药敏
1) 剪开微孔板的铝铂袋包装,取出微孔板,打开板盖;
2) Ur-孔加空白无菌的HP药敏培养液100ul,作为脲酶阴性对照及无菌对照;
3) 用无菌吸嘴将HP分离培养液中的阳性培养物吹打分散(约40-60下,目的为将颗粒吹打均匀,
吹打过程中控制不产生气泡),Ur+孔及CAT孔加阳性培养物50ul,CAT孔再滴入CAT反应液1滴,
CAT孔在15分钟内观察结果,板盖上作好标记;
4) 取阳性培养物100ul加至HP药敏培养液中混匀,接种GC孔及抗生素孔100ul/孔;
5) 将不干胶膜平整贴于整个药敏微孔板面;
6) 盖回板盖,放至35~37℃恒温箱中培养48-72小时,期间GC孔生长时,即可进行判读。
3. 判读A/0
1) 测定:Ur-孔呈黄色,Ur+孔变紫红色,CAT孔产生气泡,表明分离菌株为HP,其它反应谱为非
HP;
2) 药敏:结果应在GC孔明显红浊时判读。低、高浓度孔均不变红浊,判敏感(S);低浓度孔变
红浊,高浓度孔不变,判中敏(M);低、高浓度孔均变红浊,判耐药(R)。